در کروماتوگرافی مایع فاز معکوس یا همان HPLC ، فاز ساکن یک ماده غیرقطبی مثل اکتادسیل سیلان است که به صورت شیمیایی به ذرات پرکننده متصل می شود و فاز متحرک یک حلال نسبتاً قطبی مثل متانول، یا مخلوطی از  متانول و حلال های دیگر است.

مخلوطی که باید جداسازی شود توسط حلال یا مخلوطی از حلال ها (فاز متحرک) به ستون که با فاز ساکن پر شده منتقل می شود. در شرایط بهینه، اجزایی که باید جداسازی شوند، با سرعت های متفاوت از فاز ساکن عبور کرده و ستون را در زمان های مختلف ترک می کنند. پیک های گونه های خروجی از ستون به کمک یک آشکارساز مشخص می شوند و خروجی که یک کروماتوگرام است رسم می شود.